ab液相色谱质谱使用方法

1 加装保护柱——保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(50～100次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。

2 过滤流动相和样品——流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48 h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0. 45μm ( 0. 22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。

3 净化样品——当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。

4 避免高柱压——虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000 p si (磅/平方英寸) ,但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命,避免的方法是：

（1）柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱最大允许压力的一半为宜。

（2）当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。

（3）使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。

5 注意温度和酸碱度——一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃,以低于40℃为宜,特别是在流动相pH接近使用限度时,更应降低使用温度。

温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解,从而使填料性质改变,柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。

目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10,但在实际使用时应避免极端的pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用 ,如必须要在极端的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害:

（1）在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相

（2）降低使用温度

（3）检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”彻底清洗

6 正确及时的冲洗——开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。

一、开、关机顺序：

开机：通氮气→开电源→设置温度（柱箱、汽化）→加热→通空气、氢气→点火→调准基线→进样

关机：关氢气、空气→关掉加热器→通者氮气降温至室温→关电源→关氮气

二、温度设定

1、柱温设定（范围：-99℃～399℃）

例如：设置温度为50℃，命令如下

COL/AUX.1 I.TEMP 50 ENT

进样器温度设定（范围：0～99℃）

例如：设置温度为120℃，命令如下

INJ/AUX.2 120 ENT

2、了解温度设定情况

柱温：

COL/AUX.1 I.TEMP ENT

进样器：

INJ/AUX.2 ENT

3、监测实际温度

柱箱：

MONI COL/AUX.1

进样器：

MONI INJ/AUX.2

4、设定温度的启动和停止

柱箱温度和汽化室温度设定好后，按START键，开始升温（要执行程序升温，接着按START键）。

要设定温度控制自动停止，命令如下：

如设定STOPTIME 为5小时 （单位：分钟）

SHIFT.D 2/STOP.T 300 ENT

三、检测器

1 选择检测器，依次按DET 1 ENT ，选择了检测器1。如果了解现用检测器的编号，依次按DET ENT。

了解与编号相对应的检测器类型时，命令为：

MONI DET 1 ENT

2 设置检测器量程：

如设置量程1：RANG 1 ENT

显示目前使用量程：RANG ENT

AB液相色谱质谱使用方法是将样品通过柱子进行分离，然后通过电喷雾电离产生荷质比，再通过质谱仪进行检测和分析。

该方法可用于定量和定性分析化合物，广泛应用于生物、医药、环境等领域中。需要注意的是，使用前需要进行样品制备和仪器校准等步骤。