缺口平移是一种nick translation法，是实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。
缺口平移介绍
缺口平移是一种nick translation法，是实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。
缺口平移基本介绍
利用E.coli DNA多聚酶I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新合成的DNA链中从而形成高比活性的均匀标记的DNA探针。线状、超螺旋及带缺口的环状双链DNA均可作为缺口平移法的模板。
缺口平移基本原理
以限量的DNase I在待标记的双链DNA的每一条链上产生若干个单链缺口；再利用E.coli DNA多聚酶Ⅰ的 5’-3’外切酶活性和5’-3’多聚酶活性，在缺口处的5’末端每切除一个核苷酸，则在3’末端添加一个核苷酸，以修补缺口，随着缺口在DNA链上的移动，标记的核苷酸就掺入到新合成的DNA链中。此法特点是快速、简便、标记的探针均匀、特异性高；适用于较长的双链DNA；DNA多聚酶必须是E.Coli DNA多聚酶的全酶；DNA酶Ⅰ的浓度一定要适宜。
缺口平移基本操作步骤
1、用DNase I处理双链DNA，使之随机产生单链断裂。
2、DNA聚合酶I的5‘-3’外切酶活性从断裂处5‘除去一个核苷酸，同时5‘-3聚合酶活性将一个放射性核素标记的单核苷酸引入到断裂的3'端。
3、反应重复进行，结果标记的核苷酸代替了原来的核苷酸残基，形成了放射性的DNA分子。
